培养条件：为了确保细胞的健康生长，需采用以下条件：

气相

95%空气 + 5%二氧化碳；温度设定在37℃。

传代方法

进行细胞传代时，第一次建议合适的比例为1:2。定期观察细胞状态，并按照条件进行传代。

换液频率

每两天更换培养液，以维持细胞生长所需的营养。

备注

建议用户同时购买相关培养基，能够享受优惠。收到细胞后请勿立即拆开瓶盖，验证培养瓶上标记的细胞名称与订购一致，检查有无破损或泄漏情况。

细胞处理流程

收到细胞后，建议在培养至良好状态后，装满完全培养液并封好瓶口，以保证运输过程的安全。同时，需在显微镜下观察细胞生长情况，拍摄并保存不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为售后保障依据，若未提供照片则视为收到的细胞状态良好。

细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并脱落，随后加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml的完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

细胞冻存

细胞在生长至覆盖培养瓶80%面积时进行冻存：

1. 弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待其回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续要转入液氮罐中，则需在-80℃冻存至少24小时。

细胞复苏

细胞复苏步骤如下：

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶。
2. 用75%的酒精擦拭冻存管外壁，移入含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放回37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

需要注意的是，某些细胞在运输过程中可能因未牢靠贴壁而脱落。如果出现此情况，建议将培养瓶内的所有培养液收集到离心管中，进行1000rpm离心5分钟，处理后根据需求进行重新培养。

对于任何细胞运输及培养中遇到的问题，南宫28将为用户提供专业支持与解决方案，确保细胞实验的顺利进行。

以上信息如需进一步了解，欢迎访问南宫28官方网站，了解更多关于细胞培养和实验服务的信息。